Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中慢慢地扩展

从第一次注意到口内自身免疫到注意到1型号癌症临床患者的实质性百余人在孩童时代就有很好的描绘出，多个口内自身免疫特征性的孩童中都有70%在肝细胞切换后10年中肺结核癌症，而随访15年的孩童这一百份减低到84%。相比之下，分之一临床1型号癌症一半以上的型号1型号癌症的病症机制还不会获得应有的分析。

越来越多的人开始应用于分期系统来定义1型号癌症的实质性：小团体在注意到多种口内自身免疫时转到第1阶段，注意到血糖异常时转到第2阶段，注意到患者时转到第3阶段。一些多发口内自身免疫特征性的小团体，在1期和2期，实质性较迟，并发展为病症的1型号癌症。我们前描绘出了一四组在首次验证到多种口内自身免疫抽样后据估计10年无癌症的极迟实质性者，这四组患儿总数少，但外观上相当具体。随后，我们挖掘出口内自身免疫特异性CD8+T蛋白化学反应在实质性比较迟的患儿中都基本不共存，但在近期病症和长期共存的癌症患儿中都很容易验证到。这或许表明，与实质性患儿相比，这些患儿胃溃疡化学反应的调控增强。

早期分析表明，尽管调控性T蛋白(Treg)数量正常人，但癌症患儿共存一些特性缺陷，其中都包括对IL-2的化学反应潜能降低。此外，癌症患儿中都的波动CD4+T蛋白或许对调控更为重要抵抗性，展现出为波动T蛋白的诱发弱化，自然地归因于的Treg和体外归因于的正向Treg，以及免疫经历的CD4+T蛋白中都IL-2化学反应弱化。本分析的目的是描绘出了CD4+调控性T蛋白(Treg)在一小群极比较迟实质性者中都的外观上，他们的总总数为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群为基础的侧向分析，在21岁以下确诊的患儿亲友中都检查1型号癌症的危险因素。我们前描绘出了长期比较迟实质性者的外观上，他们保持多重口内自身免疫特征性最少10年，但不会注意到癌症的临床患者，迟性或非开展性胃溃疡。随后，10名继续保持无癌症并愿意提供大量血液抽样的比较迟实质性者纳入T和B蛋白特性分析。在目前为止的分析中都，8名迟实质性者(SP四组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的口内自身免疫特征性。所有的举例来说都属于1型号癌症实质性的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫对某些免疫的特征性化学反应，然而，一名患儿已经属于2期据估计6年，但不会注意到临床患者，一名患儿被诊断为癌症，该实验者72岁，在挖掘出实验抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该NADP开展了原则上审计。受控外周血单个核蛋白(PBMCs)，选用多参数流式蛋白术和T蛋白诱发试验审计NADP中都Treg的频百余人、遗传号和特性。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和紧接著)开展无监督聚类分析，审计Treg遗传号。

结果：与生活品质NADP相比，来自迟实质性体的心灵CD4+T蛋白的监督聚类表明，酪氨酸的心灵CD4+ Treg频百余人减低，与止痛药正向的TNFR相关蛋白(GITR)务实减低有关。一名HbA1c升高的患儿与实质性比较迟者和匹配的IgG相比，Treg谱不尽相同。特性分析表明，与生活品质NADP相比，来自比较迟实质性体的Treg介导的CD4+波动T蛋白诱发明显受损。展现出为对波动CD4+T蛋白CD25和CD134务实的诱发减低。

由此可知1 深入的遗传号分析表明，CD4+Treg亚型号在迟实质性队列中都减低。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标有物务实比对出10个元簇:心灵T蛋白_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T蛋白;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白;中央线程Treg_1;中央线程Treg_2;中央线程Treg_3;和中央线程Treg_4。(a)应用于9个相异Treg标有转化成的10个元簇的MST。每个键值代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在键值四组四周剪裁。每个键值中都的糕由此可知说明单个标有的务实最高级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以表明主体标有务实。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)转化成由此可知，以及FlowSOM辨别的每个元簇的裂口。(e-l)相对来说丰度为每个metacluster筒中央线由此可知(丰度> 0.05%)考虑到为HD和SP四组:中央线程Treg_2 (e),中央线程Treg_3 (f),中央线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T蛋白(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T蛋白(l)。黄色圆圈代表人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩验证。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 应用于CITRUS的分析表明号证实，Treg频百余人的减低是实质性比较迟的标志。AO旁路(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团体的纪念性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR务实开展受控，模拟FlowSOM小团体。(b) HD(外缘)和SP(斑点)四组以及NADPSP 606(黄色)中都CD25+ cd127的频百余人统计由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路弟集的筒中央线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(中央线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(中央线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(中央线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+中央线程T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3务实低压着色，上标突出的簇被辨别为SP和HD队列中间的相异。(j)筒中央线由此可知表明了在SP(斑点)和HD(灰点)四组中都，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对来说丰度(百份)。(k)直方由此可知表明每个簇的遗传号(粉红色)和Treg标有相对来说务实与背景务实(紫色);上列，中央线程Treg_3;后面一行，中央线程Treg_4。背景与所有其他簇中都标有的务实有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩验证

由此可知3 与生活品质献血者相比，实质性比较迟者心灵treg的GITR减低。每个心灵CD4+T蛋白元簇(心灵T蛋白_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T蛋白;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白;中央线程Treg_2;中央线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个务实标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的务实热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR务实串联，表明直方由此可知(c)和统计由此可知(d)。Wilcoxon配对标记秩和验证，p< 0.07(黄色)所有NADP包括，p< 0.05(紫色)NADPSP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR务实，从AO旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)串联，表明直方由此可知(e)和统计由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩验证

由此可知4 来自比较迟实质性的CD4+ treg蛋白掌控波动CD4+T蛋白的潜能降低。SP四组用紫色的中央线和圆圈说明，HD四组用黑色的中央线和圆圈说明，黄色的中央线/圆圈说明NADPsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白开展分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按观察的百份起始。用抗CD3 /28微珠转化蛋白，培育出3天后开展流式蛋白术验证。(a-d)与CD4+此番者相对来说应的treg培育出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育出。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。应用于特征性对照(酪氨酸的响应蛋白则有treg)计算诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 波动CD4+T蛋白对比较迟实质性的T蛋白转化的诱发更寻常。SP四组用紫色的中央线和圆圈说明，HD四组用黑色的中央线和圆圈说明，黄色的中央线/圆圈说明NADPsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白开展分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按观察的百份起始。用抗CD3 /28微珠转化蛋白，培育出3天后开展流式蛋白术(CD25反染)和蛋白因弟分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者联合培育出。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE诱发花红(b)。(c,d) CD25诱发花红(c)和CD134诱发花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中都的务实。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出的事实是，来自比较迟实质性弟的转化心灵CD4+Treg在GITR务实中都获得了适配和丰富，务实了全面分析Treg在1型号癌症风险小团体中都的异质性的必要性。

原文原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28